注射用炎琥寧的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法確認(rèn)

摘要】  目的：建立注射用炎琥寧細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。方法：按《中國藥典》2005年版（二部）附錄收載的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法及指導(dǎo)原則進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：注射用炎琥寧經(jīng)1→40倍稀釋后對鱟試劑無干擾作用。結(jié)論:細(xì)菌內(nèi)毒素檢測方法可用于注射用炎琥寧的熱原檢查。

【關(guān)鍵詞】  細(xì)菌毒素 鱟試劑 炎琥寧 HtPot10恒溫金屬浴

     注射用炎琥寧具有清熱、解毒、抗炎的功能，臨床應(yīng)用于病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染。臨床用藥廣泛，又常用于靜脈滴注，現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)為進(jìn)行熱原檢查［１］，由于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查具有靈敏度高，操作簡便，重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。現(xiàn)將細(xì)菌內(nèi)毒素法代替熱原檢查法。

    1  儀器與試劑

混勻器；HtPot10恒溫金屬浴（合肥艾本森科學(xué)儀器有限公司）；無熱原吸頭，微量移液器。

    細(xì)菌內(nèi)毒素工作品（CSE，效價70EU/支，批號20053，中國藥品生物制品檢定所）；鱟試劑（TAL，靈敏度0.125EU/ml，批號051109，050210，湛江安度斯生物有限公司）；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（批號200050208，含量≤0.03EU/ml，湛江海洋生物制品檢定廠）；注射用炎琥寧（供試品，規(guī)格每支0.2g，批號051209、0501018、050926，哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司）。

    2  方法與結(jié)果

    2.1  鱟試劑靈敏度（λ）復(fù)核  按細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法［２］，用BET水將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成2、1、0.5、0.25λ4個濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，靈敏度為0.125EU/ml的鱟試劑符合規(guī)定。見表1。將表1數(shù)據(jù)代入公式λc=lg-1∑xini  λc=0.125。表1  鱟試劑靈敏度復(fù)核實(shí)驗(yàn)結(jié)果TAL內(nèi)毒素濃度（EU/ml）0.250.1250.06250.03125靈敏度（λc）051109++--0.125050210++--0.125

　　2.2  注射用炎琥寧細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）的確定  L=K/M，式中K為規(guī)定的給藥途徑，人用每千克體重每1h可接受的內(nèi)毒素zui大劑量，注射劑的K=5.0EU/kg·h；M為人用每千克體重每1h給藥的zui大劑量，經(jīng)計算，供試品M=1.0ml/kg·h，因此細(xì)菌內(nèi)毒素理論限值為：L=K/M=5/1.0=5EU/ml。

    2.3  供試品的zui大有效稀釋倍數(shù)（MVD）  選用靈敏度為0.125EU/ml鱟試劑時，MVD=Lλb=50.125=40倍。

    2.4  供試品干擾初篩試驗(yàn)  用BET水將注射用炎琥寧（批號051209）分別稀釋成原液、1→10、1→20、1→40系列濃度，以各稀釋濃度供試品將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成2、1、0.5、0.25λb4個濃度的內(nèi)毒素溶液，與鱟試劑混合進(jìn)行抑制/增強(qiáng)試驗(yàn)，結(jié)果表明，供試品在較高濃度時對鱟試劑有干擾作用，之外，其直接毒性作用可刺激心血管、肝臟等臟器與功能，是導(dǎo)致肝細(xì)胞局灶或彌漫性壞死的主要原因。肝細(xì)胞可出現(xiàn)局灶或彌漫性壞死，門脈周圍纖維化。在供試品至少1→40稀釋后則對鱟試劑無干擾作用，